Journal title
عنوان نشریه
Journal of Torbat Heydariyeh University of Medical Sciences
Medical Sciences
http://jms.thums.ac.ir
1
admin
2716-9669
2716-9669
doi
fa
jalali
1397
6
1
gregorian
2018
9
1
6
2
online
1
fulltext
fa
بهینه سازی و مقایسه سه حامل تجاری درترانسفکشن موثر به سلولهای تک هسته ای خون محیطی (PBMCs)
Optimization and comparison of three commercial carriers for efficient transfection into the peripheral blood mononuclear cells (PBMCs)
تخصصي
Special
كاربردي
Applicable
<strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">زمینه و هدف:</span></span></strong> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">سلول­ های تک هسته ­ای خون محیطی (</span></span><span dir="LTR">PBMC</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">) از اجزای اصلی سیستم ایمنی بوده </span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">که </span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">در اغلب مطالعات ایمونولوژیک مورد استفاده قرار می­گیرند. ترانسفکشن این سلول­ها به این جهت که بیشتر روش های انتقال</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> به سلول­های </span></span><span dir="LTR">PBMC</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">، بازدهی مناسبی ندارند، از موضوعات کلیدی محسوب می ­شود. هدف از مطالعه حاضر مقایسه </span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">سه حامل</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> تجاری در ترانسفکشن سلول­ های</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> خون محیطی است.</span></span><br>
<strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">روش­ ها:</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> جداسازی سلول های </span></span><span dir="LTR">PBMC</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> از خون محیطی توسط فایکول انجام شد. پس از کشت سلول های مذکور، </span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">وکتور </span></span><span dir="LTR">PMAX-GFP</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> با استفاده از کیت پلی فکت، لیپوفکتامین 2000 و لیپوفکتامین 3000 به سلول ها ترانسفکت شد و میزان ترانسفکشن هر کدام از روش­ها توسط میکروسکوپ فلورسنت مورد بررسی قرار گرفت.</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"></span></span><br>
<strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">نتایج:</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> میزان ترانسفکشن سلول­های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:12.0pt;">PBMC</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> توسط لیپوفکتامین 2000 و لیپوفکتامین 3000 پس از گذشت24، 48، 72 و 120 ساعت حدود 2 تا 3 % و میزان ترانسفکشن این سلول­ ها توسط پلی فکت پس از گذشت 120 ساعت حدود 70% بود.</span></span><br>
<strong><span dir="RTL"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">نتیجه­ گیری:</span></span></span></strong><span dir="RTL"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> به طور کلی بازده ترانسفکشن سلول­ های </span></span></span><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">PBMC</span></span><span dir="RTL"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> توسط پلی­فکت نسبت با افزایش زمان بهترین بازدهی را داشت که روش جدیدی برای انتقال ژن به این سلول می باشد. به طور کلی<br>
می­توان گفت عامل زمان و سمیت کمتر پلی فکت برای سلول های </span></span></span><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">PBMC</span></span><span dir="RTL"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> حائز اهمیت بوده و باعث افزایش بازده ترانسفکشن این سلول­ ها نسبت به سایر حامل های تجاری استفاده شده در این مطالعه می باشد.</span></span></span>
<strong><em>Background & Aim</em></strong><em>:</em> Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMCs) are the main components of the immune system, including lymphocytes and monocytes. These cells are being used in most immunological studies and therefore, isolation, culture and transfection of these cells are of great importance. The transfection of these cells is currently a key concern; this is because most common methods of transfection into the PBMCs are not well suited. The purpose of this study was to compare and optimize the effects of three commercial methods (PolyFect, Lipofectamine 2000 and Lipofectamine 3000) on PBMC transfection using PMAX-GFP vector.<br>
<strong><em>Methods</em></strong><strong>:</strong> PBMC cells were isolated from the peripheral blood by Ficole. Following the cell culture, the PMAX-GFP vector was transfected into the cells using the Polyfect, Lipopactamine 2000 and Lipopactamine 3000. After 24, 72 and 120 hours, the transfection rate for each method was evaluated by fluorescence microscope.<br>
<strong><em>Results</em></strong>: Based on the obtained results, the level of transfection for PBMCs by Lipopactamine 2000 and Lipopactamine 3000 at all times was about 2-3%. The amount of transfection of these cells by the Polyfect after 120 hours was about 70%.<br>
<strong><em>Conclusion</em>:</strong> Generally, the efficiency of transfection of PBMCs s by Polyfect was probably the best in terms of increasing time, which introduces a new method for gene transfer into these cells. However, further studies are required to achieve the highest conversion efficiency of PBMC cells.
سلولهای خون محیطی, ژن رسانی, حامل غیر ویروسی
PBMC cells, Gene Delivery, Non-viral vector
1
9
http://jms.thums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-587-1&slc_lang=fa&sid=1
Sepideh
Khatibi
سپیده
خطیبی
KHatibiS921@mums.ac.ir
10031947532846008212
10031947532846008212
No
Department of Medical Biotechnology, Faculty of Medicine, Mashhad University of Medical Sciences, Mashhad, Iran
گروه زیست فناوری پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی مشهد، مشهد، ایران
Zeinab
Zare
زینب
زارع
zzarei19@yahoo.com
10031947532846008213
10031947532846008213
No
Department of Tissue Engineering & Applied cell Sciences, School of Advanced Technologies in Medicine, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran
گروه مهندسی بافت و سلولی کاربردی، دانشکده فناوری های نوین، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران
Seyed Hamid
Aghaee-Bakhtiari
سید حمید
آقایی بختیاری
aghaeibh@mums.ac.ir
10031947532846008214
10031947532846008214
Yes
Bioinformatics Research Center, Mashhad University of Medical Sciences, Mashhad, Iran
مرکز تحقیقات بیوانفورماتیک، دانشگاه علوم پزشکی مشهد، مشهد، ایران