Journal of Torbat Heydariyeh University of Medical Sciences

fa کلونینگ، بیان، تخلیص و بررسی وضعیت ایمنوتراپی پروتئین کایمریک TGFαL3-SEB در درمان سرطان پستان Cloning, expression, purification and the study of immunotherapy status of TGFαL3-SEB chimeric protein in breast cancer treatment تخصصي Special پژوهشي Research زمینه و هدف: سوپرآنتیژن های باکتریایی قادرند لنفوسیت های T را بدون توجه به اختصاصی بودن آنها تحریک کرده و سبب آزادسازی حجم وسیعی از سایتوکاین ها، از لنفوسیت های T و مونوسیت ها گردند در نتیجه آنها می توانند سیستم ایمنی بیمار را در جهت از بین بردن سلول های سرطانی فعال کنند. در این مطالعه برای اولین بار پروتئین کایمریک TGFαL3-SEB از طریق اتصال ناحیه  سوم فاکتور رشد اپیدرمی به انتروتوکسین تیپ B استافیلوکوکوس اورئوس طراحی و تولید گردید. بعلاوه فعالیت ضد توموری آن بر علیه رده سلول سرطان پستان انسانی مورد ارزیابی قرار گرفت. روش ها: پروتئین کایمریک TGFαL3-SEB از طریق اتصال ژنتیکی انتهای آمینی tgfαl3 به انتهای کربوکسی seb با واسطه لینکر GGSGSGGG طراحی شد. حامل نوترکیب pET28a::tgfαl3-seb به میزبان بیانی اشرشیاکولی BL21(DE3) منتقل  و به صورت یک پروتئین کایمریک بیان گردید. سپس فعالیت ضد توموری پروتئین کایمریک TGFαL3-SEB بر روی رده سلولی سرطان پستان انسانی مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج: یافته های حاصله از طریق colony PCR، هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید شد. پروتئین کایمریک با وزن مولکولی kDa 31 بیان، تخلیص و سپس از طریق آنالیز وسترن بلات تایید گردید. بررسی اثر ضدتوموری نشان داد. TGFαL3-SEB قادر است رشد سلولهای سرطان پستان را مهار کند. نتیجه گیری: نتایج نشان داد که پروتئین کایمریک TGFαL3-SEB با موفقیت طراحی، بیان و تخلیص گردیده و احتمالا میتواند به عنوان کاندید انتخابی ایمنوتراپی سرطان پستان مورد استفاده قرار گیرد. Background & Aim: Bacterial superantigens, stimulate polyclonal T cells irrespective of their antigen specificity, resulting in a massive release of cytokines from T cells and monocytes, and suggest that that they could be candidates of new antitumor agents. Recent attempts have been done to specifically target superantigens towards tumors. Here, we evaluate TGFαL3-SEB fusion protein as a new antitumor candidate by genetically fusing the third loop of transforming growth factor alpha (TGFalphaL3) to staphylococcal enterotoxin type B. Methods: Recombinant TGFαL3-SEB sequence was constructed by fusing the N-terminal of tgfαl3 and C-terminal of seb using hydrophobic GGSGSGGG amino acid linker. In this study, gene coding for the SEB superantigen was amplified. The PCR product containing the seb gene was digested by EcoRI and HindIII and cloned in pET28a expression vector. Then the synthetic tgfα-linker sequence was digested by BamHI and EcoRI and cloned in pET28::seb vector. The recombinant pET28:tgfαl3-seb transformed into E. coli BL21(DE3). Expression of recombinant protein was examined by SDS-PAGE and western blotting. In vitro antitumor activity against MDA-MB-468, human breast cancer cells expressing EGFR, was evaluated. Results: Cloning of tgfαl3-seb was confirmed by colony-PCR, enzymatic digestion and sequencing. The recombinant TGFαL3-SEB fusion protein with molecular weights of 31kDa was expressed and confirmed by anti-his western-blot analysis. The TGFaL3-SEB chimeric protein exhibited potent in vitro antitumor activity. Conclusion: Our findings indicated that TGFαL3-SEB fusion protein can be successfully constructed expressed and purified and may serve as a useful antitumor candidate for breast cancer immunotherapy. انتروتوکسین تیپ B, استافیلوکوکوس اورئوس, کلونینگ, ایمنوتراپی, فاکتورα رشد اپیدرمی, سرطان پستان SEB, Staphylococcus aureus, Cloning, Immunotherapy, Transforming Growth Factor alpha, Breast Neoplasms 13 25 http://jms.thums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-579-1&slc_lang=fa&sid=1 Forough Yousefi فروغ یوسفی forough.y@gmail.com 10031947532846008183 10031947532846008183 No Department of Microbiology and Parasitology, Faculty of Medicine, Bushehr University of Medical Sciences, Bushehr, Iran بخش میکروب شناسی و انگل شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی بوشهر، بوشهر، ایران Seyed Davar Siadat سید داور سیادت d.siadat@gmail.com 10031947532846008184 10031947532846008184 No Department of Mycobacteriology and Pulmonary Research, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran گروه سل و تحقیقات ریوی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Mohammad Mehdi Aslani محمد مهدی اصلانی mmaslani@yahoo.com 10031947532846008185 10031947532846008185 No Department of Bacteriology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش باکتری شناسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Abbas Ali Imani-Fooladi عباس علی ایمانی فولادی imanifouladi.a@gmail.com 10031947532846008186 10031947532846008186 No Applied Microbiology Research center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله، تهران، ایران Omid Nasiri امید نصیری omid201262@gmail.com 10031947532846008187 10031947532846008187 No Department of Bacteriology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش باکتری شناسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Seyed Fazlollah Mousavi سید فضل الله موسوی sadatff@yahoo.com 10031947532846008188 10031947532846008188 Yes Department of Bacteriology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش باکتری شناسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران